第十四篇维 生 素 类 药 物 分 析

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第 十四 章

维生素类药物的分析

游 奎 一

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第十四章 维生素类药物的分析

维生素发展史

公元前3500年-古埃及人发现能防治夜盲症的物质,也就是后来 的维A。

1600年-医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。

1747年-苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病,也就是后来的维C。

1831年-胡萝卜素被发现。

1905年-甲状腺肿大被碘治愈。

1911年-波兰化学家丰克为维生素命名。

1915年-科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的 1916年-维生素B被分离出来。

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第十四章 维生素类药物的分析

1920年-发现人体可将胡萝卜转化为维生素A。

1922年-维E被发现。

1928年-科学家发现维B至少有两种类型。

1933年-维E首次用于治疗。

1948年-大剂量维C用于治疗炎症。

1949年-维B3与维C用于治疗精神分裂症。

1954年-自由基与人体老化的关系被揭开。

1957年-Q10多酶被发现。

1969年-体内超级抗氧化酶被发现。

1970年-维C被用于治疗感冒。

1993年-哈佛大学发表维生素E与心脏病关系的研究结果。

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第十四章 维生素类药物的分析

本章基本要求

一、掌握维生素类药物的结构特点与分析方法之间的关系。

二、掌握维生素类药物的鉴别原理与方法。

三、掌握三点校正法测定维生素A的原理、测定方法与计算方法 四、掌握维生素D的HPLC含量测定法和维生素E的GC含量测定法 五、掌握维生素B1非水溶液滴定法与维生素C碘量法的测定原理

方法与注意事项。

六、熟悉本类药物其他的含量测定方法 七、熟悉本类药物杂质检查方法 八、了解维生素A三点校正法的推导过程

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第十四章 维生素类药物的分析

维生素:

是维持人体正常代谢机能所 必需的微量活性营养物质。

人体不能合成维生素。

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第十四章 维生素类药物的分析

分类

按溶解度可分为:

脂溶性维生素: VitA、D2、D3、 E、K1 等

水溶性维生素: VitB族(B1、B2、B6、B12)

VitC、叶酸、烟酸、泛酸等

VitM

尼克酸

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第十四章 维生素类药物的分析

第一节 维生素A

R:

-H -COCH3

维生素A醇 维生素A醋酸酯

-COC15H31

维生素A棕榈酸酯

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第十四章 维生素类药物的分析

一、

结构与性质

(一)为一个具有共轭多烯侧链的 环己烯 ? 具有UV吸收 ? 存在多种立体异构化合物 ? 易发生脱氢、脱水、聚合反应

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第十四章 维生素类药物的分析

VitA2

去氢维生素A

VitA3

去水维生素A

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第十四章 维生素类药物的分析

鲸醇(维生素A醇的二聚体)

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第十四章 维生素类药物的分析

一、

结构与性质

(二) 共轭多烯侧链

易被氧化

VitA ?? ? ? ? ? ? ? ?? VitA 醛 ? 环氧化物 ??? ? VitA 酸

[O ]

紫外线、O 2、氧化剂

(三) 溶解性: 不溶于水,易溶于有机溶剂

和植物油等

? △或有金属离子存在时氧化↑

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第十四章 维生素类药物的分析

环氧化物

VitA醛

VitA酸

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第十四章 维生素类药物的分析

二、 鉴 别 试 验 (一) 三氯化锑反应

VitA ?? ? ?? 蓝色 ? 紫红

CHCl3

SbCl 3

条件: 无水无醇

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第十四章 维生素类药物的分析

+

CH 2

-

SbCl 5 RCOO

蓝色

+

CH 2

SbCl 5 RCOO

-

紫红

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第十四章 维生素类药物的分析

二、 鉴 别 试 验

(二) UV法 (BP(2000))

VitA ?? ? ?? ?? ?? ? ?? 去水VitA

△ 无水乙醇 HCl

λmax为326nm 一个吸收峰

λmax为348,367,389nm 三个吸收峰

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第十四章 维生素类药物的分析

CH 2

VitA

去水VitA(VitA3)

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第十四章 维生素类药物的分析 367nm

389nm

348nm 326nm

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第十四章 维生素类药物的分析

二、 鉴 别 试 验

(三) TLC法 BP 杂质对照品法 显色剂 : 三氯化锑

USP 显色剂 磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值

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第十四章 维生素类药物的分析

三、 含量测定 (一)UV法

维生素A2

立体异构体 氧化降解产物 合成中间体

维生素A3

环氧化物

维生素A醛

维生素A酸

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第十四章 维生素类药物的分析

三、 含量测定

三点校正法(法定方法) 1. 原理: (1)杂质的吸收在310~340nm波长范围 内呈一条直线,且随波长的增大吸收度 减小; (2)物质对光的吸收具有加和性。

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第十四章 维生素类药物的分析

2. 波长的选择:

( 1) ? 1

VitA的?max(328nm)

( 2) ? 2 ? 3

分别在?1的两侧各选一点

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第十四章 维生素类药物的分析

第一法

等波长差法

?328 ? ?316 ? ?340 ? ?328

??= 12nm 测定对象: VitA醋酸酯

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第十四章 维生素类药物的分析

第二法 等吸收比法

6 A?1 ? A?2 ? A?3 7

?1=325nm, ?2=310nm, ?3=334nm

测定对象:

VitA醇

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第十四章 维生素类药物的分析

3. 测定法

第一法:直接测定法

(1)基本步骤:

?第一步

测定吸光度,确定最大吸收波长

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第十四章 维生素类药物的分析

第二步

% 求 ?1cm ( 样 )

A % ?1cm(样) ? C(%) ? l

注意:

?

% % ?1cm (样) ? ?1cm (纯 )

? C 为混合样品的浓度

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第十四章 维生素类药物的分析

效价是指每克供试品中所含维 生素A的国际单位数(IU/g)

第三步

求效价

% ? E ? 换算因数 效价(IU / g) (样) 1cm(样)

换算因数由纯品计算而得:

效价(IU / g) 换算因数= % E1cm(纯)

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第十四章 维生素类药物的分析

1IU ? 0.344?g维生素A醋酸酯

1 ? 10 ?g 效价(IU / g) ? ? 2907000 0.344?g

效价(IU / g) 2907000 换算因数= ? % 1530 E1cm(纯)

6

? 1900

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第十四章 维生素类药物的分析

1IU ? 0.300?g维生素A醇

1 ? 10 ?g 效价(IU / g) ? ? 3330000 0.300?g

效价(IU / g) 3330000 换算因数= ? % 1820 E1cm(纯)

6

? 1830

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第十四章 维生素类药物的分析

第四步:求标示量%

IU / 丸 标示量%= ? 100% 标示量

IU / g ? 平均丸重 = ? 100% 标示量 A ? 换算因数? 平均丸重 C ? ? 100% 标示量

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第十四章 维生素类药物的分析

第一法 直接测定法 ? 方法:

适应于纯度高的维生素A醋 酸酯

S ?? ? ?? 9~15IU / ml 溶液 ? 分别于300、 316、 328、 340、 360nm 处测Ai

环己烷

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第十四章 维生素类药物的分析

? 判断 ? max是否在326~329nm之间

? max在326~329nm之间

是 否

? 求算 Ai / A328

改用第二法

并与规定值比较

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第十四章 维生素类药物的分析

Ai / A328

A 300 A 316 A 328 A 340 A 360 A 328 A 328 A 328 A 328 A 328

规定值

? 0.555 ? ? 0.907 ?

差值

? 1.000 ? 0 ? 0.811 ? ? 0.299 ?

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第十四章 维生素类药物的分析

? 判断差值是否超过规定值的 ? 0.02 有一个以上 超过 ? 0.02 ? 计算 A328(校正)

无超过 ? 0.02

? 用A328计算

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第十四章 维生素类药物的分析

A328?校正? ? 3.52?2 A328 ? A316 ? A340 ?

f?

A 328(校正) ? A 328 A 328

? 100%

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第十四章 维生素类药物的分析

第二法

A 328?校正?

A 328

第二法

-15%

-3%

0

3%

f值

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第十四章 维生素类药物的分析

讨论

1. VA 醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法 (即代数法)推导而来;VA醇的吸收度校正公式 是用相似三角形法(几何法或称6/7定位法)推导 而来。

2. 在应用三点校正法时,除其中一点在最大吸收波 长处测定外,其余两点均在最大吸收峰的两侧进 行测定。

在测定前务必要校正波长。

测定的样品 应不得少于两份。

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第十四章 维生素类药物的分析

VitAD胶丸中VitA的含量测定 精密称取本品装量差异项下的内容物 0.1287g ( 规 格 10000VitAIU/ 丸 , 平 均 装 量 0.07985g/丸)至10ml烧杯中,加环己烷溶解并 定量转移至 50ml 量瓶中,用环己烷稀释至刻 度,摇匀;精密量取2.0ml,置另一50 ml量瓶 中,用环己烷稀释至刻度,摇匀。

以环己烷 为空白,测定最大吸收波长为 328nm ,并在 下列波长处测得吸收度为

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第十四章 维生素类药物的分析

A300 A316 A328 A340 A360

:0.374 :0.592 :0.663 :0.553 :0.228

A300 /A328 A316/A328 A328/A328 A340/A328 A360/A328

:0.564 :0.893 :1.000 :0.834 :0.344

求本品中维生素A占标示量的百分含量?

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第十四章 维生素类药物的分析

A300 /A328 A316/A328 A328/A328 A340/A328 A360/A328

:0.564 :0.893 :1.000 :0.834 :0.344

- - - - -

0.555 0.907 1.000 0.811 0.299

= = = = =

+ 0.01 -0.01 0 + 0.02 + 0.04

A328(校正) = 3.52 ( 2A328 - A316 - A340 )

=3.52 ( 2×0.663 – 0.592 – 0.553 )

=0.637

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第十四章 维生素类药物的分析

A328(校正) – A328(实测) A328(实测)

×100 =

0.637 – 0.663 0.663

×100

= -3.92

E

1% 1cm

( 328nm ) =

A328(校正)

100ms/D

=

0.637 100×0.1287/1250

= 61.87

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第十四章 维生素类药物的分析

供试品中维生素A效价= E 1% 1cm ( 328nm ) ×1900

= 61.87 ×1900 =117553(IU/g )

VA效价(IU/g) ×每丸内容物平均装量(g/丸) 标示量% = ×100% 标示量( IU/丸) 117553×0.07985 = 10000 ×100% = 93.9%

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第十四章 维生素类药物的分析

(3)第二法 (等吸收比法) [ 皂化法、6/7A法 ] 适用于维生素A醇 第一法无法消除杂质干扰时用此法

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第十四章 维生素类药物的分析

脂溶性 ? VitA 醋酸酯 ? VitA 醇 ? KOH / 乙醇 S ?? ? ??? 皂化液? ? ?植物油 ? 甘油和脂肪酸盐 ? 水溶性

?? ? ? ?? 除去植物油的干扰?? ? ? ?? 异丙醇

乙醚提取 挥干乙醚

溶解 ? 稀释至9~15IU / ml ? 于300、 310、 325、 334nm 处测Ai

并确定最大吸收波长(325nm)

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第十四章 维生素类药物的分析

? 判断?max是否在323~327nm之间

是 否

? 计算

A300

A325

取未皂化样品 采用色谱法纯 化后再测定

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第十四章 维生素类药物的分析

? 判断 A300 /A325 是否大于0.73

否 是

? 计算A325(校正)

取未皂化样品 采用色谱法纯 化后再测定

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第十四章 维生素类药物的分析

A325?校正? ? 6.815 A325 ? 2.555 A310 ? 4.260 A334

f?

A 325(校正) ? A 325 A 325

? 100%

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第十四章 维生素类药物的分析

A325?校正?

-3%

A325

0

A325?校正?

3%

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第十四章 维生素类药物的分析

(二)HPLC法

适合于维生素A醋酸酯原料和制剂中维生素A的含量测定。

高效液相色谱仪,紫外检测 固定相:硅胶为填充剂

流动相:正己烷:异丙醇=997:3

检测波长:325nm

(二)

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第十四章 维生素类药物的分析

(三)三氯化锑比色法

VitA + SbCl 3 优点 :

标准曲线法定含量

蓝色

λmax 618nm~620nm

简便、快速

呈色不稳定 (5 ~ 10s内) H 2O ?? SbOCl ? 水分干扰 SbCl 3 ?? 缺点 与标准曲线温差≤1℃ 专属性差 三氯化锑有腐蚀性

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第十四章 维生素类药物的分析

第二节 维生素B1的分析

维生素B1广泛存在于米糠、麦麸和酵母中,还可以 人工合成。

具有维持糖代谢及神经传导与消化的正常功能,主

要用于治疗脚气病,多发性神经炎和胃肠道疾病。

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第十四章 维生素类药物的分析

第二节 维生素B1的分析

H3C N N

HCl NH2

CH2 N

+

S

CH2CH2OH CH3

盐酸硫胺

Cl-

氨基嘧啶环-CH2-噻唑环(季铵碱)

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第十四章 维生素类药物的分析

一、结构与性质

(一) 溶解性 1、易溶于水 2、水溶液呈酸性 (二) UV 共轭双键

λmax = 246nm E1%1cm=406~436

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第十四章 维生素类药物的分析

(三)

OH ? ?O ?

硫色素反应

正丁醇

? ? ??? 硫色素?? ? ?? 蓝色荧光 铁氰化钾

(四)嘧啶环 —— 噻唑环 ——

(五)盐酸根

与生物碱↓→↓ (K2HgI4,硅钨酸等)

呈氯化物的反应,用于鉴别。

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第十四章 维生素类药物的分析

二、

鉴别试验 ChP

? H 2O 环合

(一) 硫色素反应

NaOH

VitB1 ?? ? ?? ?? ? ?? ?? ?? ?? ? ? ? ? ? 硫色素 ? ? ? ? ? [O ] -2H 蓝色荧光? ? ? ? ?荧光消失 ? ? ?

OH?

K 3 Fe(CN) 6

正丁醇

H

+

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CH 2 N NH 2 HCl

第十四章 维生素类药物的分析

N S CH 3 C 2 H 4 OH

N H3C

NaOH

N H 3C N

CH 2 NH 2 O

N NaS

CH 3 C 2H 4OH

N

-H 2 O

N N N NaS

CH3 C2H4OH

H3C

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第十四章 维生素类药物的分析

?? ??

????

? 2H

+2H

环合

N H3C N N H

N S

CH 3 C 2 H 4 OH

N H3C N N

N S

CH3 C2H4OH

硫色素

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第十四章 维生素类药物的分析

(二) 沉淀反应 VitB1

K 2 HgI4 ??H ? + ?? ?淡黄 ? [ B ] ? H 2 HgI 4 ?

? ? ?? ? ? ? ? [ B ] ? HI ? I + 2 红色 H

[ B ] 2 ? SiO2 ?OH ?2 硅钨酸 ?? H ? ? + ? ?白色 ? 12WO3 ? 4 H 2 O

I 2 ? KI

?? ? ? + ? ?白色扇形

H

苦酮酸

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第十四章 维生素类药物的分析

(三) 其他反应

VitB1

NaOH

S元素反应

NO3?? Pb?

?

NaS

PbS

?? ? ?? AgCl ?白 ? ? ? ? ? ? ? ?? ? ?? HNO 3 HNO

?

AgNO ?

NH ? ? H ? O

MnO ? ?? ? ?? Cl ? + ?H

? ?? ? ? ? ?? 蓝

KI ? 淀粉试纸

Cl-反应

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第十四章 维生素类药物的分析

三、 含量测定 (一)非水溶液滴定法

?B?? Cl

?

? HCl + ? HClO ?

?

?? ? ? ???B?? ClO ? ? HClO ?

Hg (Ac ) ?

以电位法指示终点

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第十四章 维生素类药物的分析

反应摩尔比为1:2

c ? M 0.1 ? 337.27 T? ? n 2 ? 16.86?mg / ml ?

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第十四章 维生素类药物的分析

(二) UV法

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第十四章 维生素类药物的分析

ChP 片剂、注射剂

1% E1cm

g/100ml

= 421

A = ECL

(每片)相当于标示量的%=

D 平均片重 × 100% × × 1% × 标示量 E1cm 100 W A

g

规格 g/片

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第十四章 维生素类药物的分析

(每ml)相当于标示量的%=

× 1% × E1cm 100 A

稀释倍数

V

1 100% × 标示量

ml

规格 g/ml

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第十四章 维生素类药物的分析

(三) 硫色素荧光法 1、 原理

VitB1

异丁醇

铁氰化钾

NaOH

硫色素

荧光

或正丁醇

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第十四章 维生素类药物的分析

2、

特点

(1)灵敏度高,线性范围宽; (2)代谢产物不干扰,适用 于体液分析.

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第十四章 维生素类药物的分析

第三节 维生素C的分析

维生素C又称L-抗坏血酸,在化学结构上跟糖类 物质十分相似,有四种光学异构体,其中以L-构型

右旋体生物活性最强。

常见的有:泡腾片,泡腾颗粒等。

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第十四章 维生素类药物的分析

第三节 维生素C的分析

CH OH 2 6 H *C OH 5 O 1 *4 HO

3 2

结构特点: 烯二醇

O OH

内酯环

手性碳

L-抗坏血酸

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第十四章 维生素类药物的分析

一、 结构与性质

(一) 溶解性

1、易溶于水 2、水溶液呈酸性

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第十四章 维生素类药物的分析

(二)

酸性 一元酸

C3-OH的 pKa = 4.17 C2-OH的 pKa = 11.57

CH OH 2 6 H C5 OH O

4 3 2 1

O OH

HO

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第十四章 维生素类药物的分析

(三) 光学活性

CH OH 2 6 手性C(C4、C5) H C5 OH * O

L(+)-抗坏血酸 活性最强

*

4 3 2

1

O OH

HO

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第十四章 维生素类药物的分析

(四) 还原性

二烯醇结构

C OH

C OH

O

C O

C O

二烯醇结构

二酮基结构

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第十四章 维生素类药物的分析

CH2OH H C OH O HO

CH 2OH

O

二 HO CH 酮 古 CHOH 洛 + 糖 H OH C O 酸

OH

[O]

CH 2 OH H C OH O

C

O

O

COONa H

有活性

O O 去氢抗坏血酸

有活性

无活性

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第十四章 维生素类药物的分析

(五) 水解性 与碱反应

?? ??? 单钠盐

?? ? ?? ?? ??酮酸盐

NaOH 水解

Na2CO3

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第十四章 维生素类药物的分析

CH 2 OH H C OH O NaO

O OH

CH 2 OH HO CH CHOH

Na2CO3

CH2OH H C OH O HO

?? ? ??

O

NaOH

酮 酸 盐

C C

O O

OH

COONa

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第十四章 维生素类药物的分析

(六) 具糖的性质 糖类的显色反应

?? ?? ?? ??

+

结构与糖类相似

H

+

脱水

?? ?? 显色 糠醛衍生物

脱水 吡咯

糠醛

酚类

VitC ?? ?? ?? ?? 糠醛 ?? ?? 蓝色

50℃

H

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第十四章 维生素类药物的分析

(七)紫外吸收特性

具有共轭双键,其稀盐酸溶液在243nm处有 最大吸收波长。

百分吸收系数为560. 在中性或碱性条件,吸收红移,265nm处。

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第十四章 维生素类药物的分析

二、 鉴别试验 (一) 与氧化剂的反应

VitC

CH 2 OH H C OH O HO

[O ]

去氢抗坏血酸

CH 2 OH

O OH

?? ??

[O ]

H C OH O O

O O

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第十四章 维生素类药物的分析

1、与AgNO3反应 (ChP2010)

AgNO? ?? ?? Ag ?黑 (银镜) 2、与2,6 - 二氯靛酚反应 (ChP2010)

VitC

2, 6 ? 二氯靛酚?? ?? 无色

氧化型

蓝色 ? OH OHˉ 玫瑰红色 +

VitC

还原型

H

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第十四章 维生素类药物的分析

Cl HO Cl

(玫瑰色)

N O

Cl HO Cl

H N OH

(无色)

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第十四章 维生素类药物的分析

3.其他氧化剂的反应:

亚甲蓝或高锰酸钾

碱性酒石酸铜

试剂褪色

砖红色沉淀

磷钼酸

钼蓝

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第十四章 维生素类药物的分析 4. 薄层色谱法

薄层板:GF254 展开剂:乙酸乙酯-乙醇-水=5:4:1 紫外灯:254nm

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第十四章 维生素类药物的分析

5.

糖类的反应

USP

三氯醋酸 脱水 VitC ?? ? ? ? ? 戊糖 ? ? ? ? 糠醛 或盐酸 50℃? 吡咯

蓝色

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

CH 2 OH H C OH O HO

CH 2 OH O H C OH O HO

OH C C O O CHOH 3

H2O

O

OH

H

O

CH 2 OH

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

HC O CHOH 3 CH2OH

-H2O

- CO2

(戊糖)

(糠醛)

50℃

N O CH

N H

O

CHO

N

(蓝色)

(吡咯)

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

6.

UV

BP2010

0.01mol/L HCl

? max ? 243nm

1% E1cm ? 545 ~ 585

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

三、杂质检查

1.溶液的澄清度与颜色:有色杂质 分光光度法 2.铁、铜离子:原子吸收分光光度法

3. 草酸的检查:与钙离子反应是否生成沉淀

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

四、 含量测定 (一)

碘量法

1、 原理

VitC + I 2 ?? ?? 去氢抗坏血酸 +I

指示剂: 淀粉指示液

H

+

?

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

CH 2OH H C OH O HO

+ I?

O

H+

OH

CH 2OH H C OH O O

O O

+ 2 HI

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

2、 方法

取本品约0.2g,精密称定,加新 沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶 解,加淀粉指示液1ml,立即用碘滴 定液(0.05mol/L)滴定,至溶液显蓝

色,在30秒内不褪。

每1ml碘滴定液

(0.05mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

3、

讨论 d . HCl 赶走水中O2 减少O2的干扰

(1)酸性环境 (2)新沸冷H2O (3)立即滴定

减慢VitC被O2氧化速度

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

(4)附加剂干扰的排除

片剂 —— 滑石粉 —— 过滤

丙酮 注射剂 —— 抗氧剂 —— 甲醛 Na2SO3 Na2S2O3 NaHSO3 Na2S2O5

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

N a 2 S2 O5 + H 2 O

CH 3COCH 3

N a H SO3 HC HO

CH 3 CH 3

C

SO3 Na

OH

H2C

OH S O3Na

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

(二) 2,6 - 二氯靛酚钠滴定法法 USP32 JP15 1、 原理

2, 6 - 二氯靛酚

VitC

酚亚胺

无色

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

2、 方法

样品 HPO3 ? HAc 二氯靛酚液 V样 ?? ? ? ? ?? ?? ? ? ? ?? V空 空白 自身指示终点法:出现玫瑰红为终点

??? ? 玫瑰红 ?? ?? 蓝色

OH

?

H+

?? ?? 无色

还原

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

3、 讨论

(1)酸性环境 HPO3-HAc 稳定VitC

(2)快速滴定 2min内 防止其他还原性物质干扰 (3)剩余比色测定 VitC

二氯靛酚?? ?? 测A

(定量过量)

(测剩余染料)

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

(4)缺点 需经常标定 不稳定 贮存≤一周

干扰多 氧化力较强

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

(三)HPLC法

分析条件: 色谱柱:C18 ODS(4.6mm×20cm,5um) 流动相:甲醇-5%偏磷酸=2.5:97.5

流速:1ml/min

检查波长:245nm 柱温:25 0C

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

第四节 维生素D的分析

一、结构与性质

CH3

一类抗佝偻病维生素的总称

H H CH3 CH3 CH3 H CH3

CH2 HO H H

维生素D2

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

18

11 12 13 9 19 3 4 5 6

CH2 H H

21 CH3

CH3

23

17 15 20 16 22 24

27 CH3

25

CH3

26

1

2

HO H

10

14 8 7

H

维生素D3

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

二、性质

1、性状:无色针状结晶或结晶粉末,易变质 2、溶解性:水中不溶,易溶有机溶剂(CHCl3等) 3、不稳定性:含烯键,易被氧化 4、旋光性:具有手性碳 5、显色反应: CHCl3中加醋酐与硫酸显黄色,逐渐

变红色,再迅速变紫色,最后变绿色

6、紫外吸收特性:最大吸收265nm D2吸收系数460~490,D3:465~495

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

开环的甾体:具有甾类化合物的显色反 应,可用于鉴别。

手性碳原子:具有旋光性,可用于鉴别。

多烯:可进行紫外检测。

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

二、鉴别试验

1. 显色反应

醋酐--硫酸反应 D2 黄 红 紫 绿

D3

三氯化锑反应 三氯化铁反应

紫、蓝绿

绿

橙红色渐变粉红 橙黄色

二氯丙醇和乙酰氯反应

绿色

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

2. 比旋度鉴别

维生素D2 维生素D3

无水乙醇

40mg/ml

无水乙醇

5mg/ml

比旋度值

+102.5°~+107.5° +105°~+112°

注意事项:应于容器开启30分钟内取样,

在溶液配制后30分钟内测定。

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

3.其他方法:

TLC、HPLC、制备衍生物测熔点

4.区别反应:

以96%乙醇为溶剂,加乙醇和85%硫酸,

D2显红色,在570nm处有最大吸收,D3显黄色, 在495nm处有最大吸收。

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

三、杂质检查

四、含量测定方法

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

第五节

维生素E的分析

维生素E为α-生育酚及其各种酯类,有天然品和 合成品之分。

天然品为右旋体,合成品为消旋体。

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

第五节

维生素E的分析

O

HO

苯并-二氢吡喃醇

药物分析

CH3 R2

8 7 5

第十四章 维生素类药物的分析

O

1 2* 1, 3,

*

5, 7,

*

9,

HO 6

4 3

11,

13,

R1

α-生育酚

β-生育酚

γ -生育酚

R1 CH3 CH3

H

R2 CH3 H

CH3

相对活性 1.0 0.5

0.2

δ -生育酚

H

H

0.1

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

CH 3 H3C H 3C CO O CH 3 O

CH 3

CH 3

CH 3

CH 3 CH 3

dl-α-生育酚醋酸酯

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

一、 结构与性质 苯环 + 二氢吡喃环 + 饱和烃链

1、UV 最大吸收波长284nm

2、乙酰化的酚羟基

VitE

H+ or OH?

易水解

杂质,需检查

生育酚

[O ]

醌型化合物

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

3. 溶解性:维生素E为黄色粘稠液体,易溶于有机

溶剂,不溶于水

4. 氧化性:维生素E对热稳定,但易被氧化生成醌

形产物或聚合

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

二、 鉴别

(一) 硝酸反应

HNO 3 75℃15′

VitE

生育酚

[O ]

生育红 橙红色

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

CH 3 H 3C HO CH 3

CH 3 CH 3 C 16 H 33

O

CH 3 C 16 H 33

生育酚

H3C O O

O

HNO3

生育红

(橙红色)

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

(二) 三氯化铁-联吡啶反应

CH3 CH3 O CH3 C16H33 CH3-COO CH3

KOH

CH3 CH3 O CH3 C16H33 HO CH3

药物分析

CH 3 H 3C HO CH 3 O

第十四章 维生素类药物的分析

CH 3 C 16 H 33

生育酚

[O]

Fe

3+

CH 3 H 3C O CH 3 O OH CH 3 C 16 H 33

对-生育醌

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

2+

N Fe +

2+

N Fe N

3

N

3

血红色

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

(三) UV法

0.01%无水乙醇中 λmax = 284nm λmin = 254nm

E

1% 1cm

= 41.0~45.5

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

(四) TLC法 薄层板 硅胶G

展开剂

显色剂

?-生育酚 ?-生育醌

环己烷 -乙醚(4 :1)

硫酸(105℃ 5′)

?-生育酚 醋酸酯Rf

= 0.7 Rf = 0.5 Rf = 0.9

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

三、杂质检查

1. 酸度

以NaOH滴定液(0.1mol/L)体积控制。

2. 游离生育酚

原理:

生育酚 + 2Ce

4+

? 2Ce

3+

+ 对 ? 生育醌

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

CM T? n

(M生育酚= 430.8)

0.01 ? 430.8 T? ? 2.154 (mg / ml ) 2

例 取本品 0.10g ,加无水乙醇 5ml 溶解

后,加二苯胺试液1滴,用硫酸铈液 ( 0.01mol/L ) 滴 定 , 消 耗 硫 酸 铈 液 (0.01mol/L)不得过 1.0ml。

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

限量 ≤2.15%

V?T 限量% ? ? 100% W

1.0 ? 0.002154 限量% ? ? 100% 0.1 ? 2.15%

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

四、 含量测定

(一)GC法(法定方法)

1、 GC特点 选择性好 灵敏度高 速度快 分离效能好 挥发性低、不稳定、 极性强→衍生化易 受样品蒸气压限制

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

2、

VitE测定的色谱条件

载气→N2 固定液→硅酮(OV-17)二甲基聚硅氧烷 柱温→265℃ 检测器→氢火焰离子化检测器(FID) 内标→正三十二烷 内标法加校正因子 n ≥ 500 R≥2

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

内标法:

供试液(样品+内标)

对照液(对照+内标) 是样品中不存在的物质 与被测组分峰靠近 能与各组分完全分离 与被测组分的量接近

内标物

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析 f=(As×mi)/(Ai×ms)

校正因子: ?

Wi%=(Ai×fi×ms)/(As×fs×w) ×100%

ms:内标物的质量

mi: 被测物的质量

Ai: 被测物的峰面积

As:内标物的峰面积 Wi: 被测物组分的百分含量 W:混合样品的质量

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

(二)HPLC法 外标法 此外,还有铈量法、比色 法和荧光法

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

练习与思考

[A型题]

1. 维生素B1的鉴别方法是 A.三氯化铁反应 B. 硫色素反应 C.与碱性酒石酸铜试液反应 D. 双缩脲反应

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

2. 维生素E《中国药典》规定的含量 测定方法为 A.非水溶液滴定法 B.旋光法 C.HPLC法 D.紫外分光法 E.GC法

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

[B型题]

A.亚硝基铁氰化钠反应 C.硝酸反应 E. 硝酸银试液的反应 1. 维生素C E 2. 维生素E C 3. 维生素B1 B 4. 维生素A D 5. 维生素D F D B. 硫色素反应 D. 三氯化锑反应 F.醋酐-浓硫酸

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析

[X型题] 1. 用碘量法测定的药物有 A. 醋酸地塞米松 B. 丙酸睾酮 C. 维生素C D. 硫酸阿托品 E. 维生素C注射液

药物分析

第十四章 维生素类药物的分析 本章练习题

1. 用紫外分光光度法测定维生素A含量时,采用三点 校正法的目的是什么?

2. 维生素C具有哪些鉴别反应?用什么方法测定其含量?

产生怎样的现象? 4. 用什么方法鉴别维生素A、B1、C、D以及E?

3. 维生素B1具有怎么样的性质?可用哪些方法进行鉴别?


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